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      PUREfrex®2.0無細(xì)胞蛋白合成試劑盒使用方法及組分介紹
      
        
      更新時間：2025-04-28      點(diǎn)擊次數(shù)：187次
      
        
      PUREfrex®2.0于2015年推出，相比1.0的版本PUREfrex®2.0的蛋白產(chǎn)量有所提升。PUREfrex®2.0改進(jìn)了從大腸桿菌中純化的所有組分的制備方法，并優(yōu)化了因子的組成，實現(xiàn)了比PUREfrex 1.0高2-10倍的蛋白質(zhì)生產(chǎn)率。
      圖2.png
      圖2.PUREfrex® 1.0和PUREfrex® 2.0對比數(shù)據(jù)
       
      PUREfrex®2.0使用方法（僅供參考，操作方法請查閱產(chǎn)品說明書）：
      以20ul反應(yīng)體系為例，如果需要擴(kuò)大體積可以等比例增加對應(yīng)試劑。
      1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完-全融解，然后在冰上冷卻。
      2. 在冰上融化溶液II和溶液III。
      3. 將溶液I，溶液II和溶液III 渦旋后簡短離心收集管底內(nèi)容物。
      4. 根據(jù)下列表格配置反應(yīng)液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。
      Water
      7-X μL
      Solution I
      10μL
      Solution II
      1μL
      Solution III
      1μL
      Template DNA
      X μL
      總體積
      20ul
      5. 在37°C的heat block或水浴中反應(yīng) 2~4 h，合成蛋白。
      6. 分析合成蛋白。通過SDS-PAGE驗證時，請用水稀釋反應(yīng)液后進(jìn)行電泳。
       
      試劑盒組分.png
      試劑盒組分（各組分中具體成分信息保密）：
      組分名稱
      組分內(nèi)容
      保存溫度
      Solution I
      Amino acids,   NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc.
      -20℃
      Solution II
      Proteins in 30 %   glycerol buffer
      -20℃/-80℃
      Solution III
      Ribosome (20 μM)
      -80℃
      DHFR DNA
      PCR product   containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a   positive control. (20 ng/μL)
      -20℃
      請注意：1.在打開試劑盒之前請將試劑盒儲存在-80°C的溫度下。2.溶液II和溶液III避免反復(fù)凍融。
       
      產(chǎn)品信息
      貨號
      名稱
      規(guī)格
      GFK-PF201-0.25-EX
       
      PUREfrex®2.0
      1 x 250 µl
      GFK-PF201-2ML-EX
      2ml
      GFK-PF201-10ML-EX
      5 x 2 ml
       
      當(dāng)您的蛋白質(zhì)需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構(gòu)象時，只需向PUREfrex®2.0中添加補(bǔ)充試劑即可。
       
      分子伴侶-幫助蛋白正確折疊，合成可溶形式蛋白質(zhì)
      產(chǎn)品貨號
      產(chǎn)品名稱
      規(guī)格
      GFK-PF003-0.5-EX
      DnaK Mix
      500 µl Equivalents
      GFK-PF003-10ML-EX
      DnaK Mix
      5 x 2 ml Equivalents
      GFK-PF004-0.5-EX
      GroE Mix
      500 µl Equivalents
      GFK-PF004-10ML-EX
      GroE Mix
      5 x 2 ml Equivalents
       
      幫助形成二硫鍵的添加物
      產(chǎn)品貨號
      產(chǎn)品名稱
      規(guī)格
      GFK-PF005-0.5-EX
      DsbC Set
      500 µl Equivalents
      GFK-PF005-10ML-EX
      DsbC Set
      5 x 2 ml Equivalents
      GFK-PF006-0.5-EX
      PDI Set
      500 µl Equivalents
      GFK-PF006-10ML-EX
      PDI Set
      5 x 2 ml Equivalents
       
       
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